目的 構建含小鼠血管內皮生長因子(mVEGF)的重組慢病毒表達載體,包裝成病毒顆粒后感染NS-1小鼠骨髓瘤細胞株,以便進一步探索VEGF在骨髓瘤病理生理機制中的作用。 方法 聚合酶鏈反應法擴增mVEGF基因,克隆入含嘌呤霉素抗性的pCDH慢病毒表達載體,構建出表達mVEGF的慢病毒表達載體pCDH-mVEGF;采用磷酸鈣法將慢病毒系統三質粒pCDH-mVEGF、psPAX2、pMD2.G共轉染293FT細胞包裝病毒,分別收集轉染后48 h和72 h病毒上清并感染靶細胞NS-1,初次感染72 h后開始采用嘌呤霉素篩選穩定株,篩選2周后采用ELISA法檢測穩定株細胞培養上清中mVEGF的表達,建立出穩定高表達mVEGF的NS-1小鼠骨髓瘤細胞株。 結果 成功構建重組慢病毒表達質粒pCDH-mVEGF,并包裝成慢病毒顆粒,感染NS-1細胞株后獲得靶基因的穩定高表達。 結論 成功構建出含mVEGF的慢病毒表達載體pCDH-mVEGF,慢病毒系統能有效介導目的基因在NS-1小鼠骨髓瘤細胞株中穩定表達,病毒包裝成功并能有效感染NS-1細胞,為進一步探索VEGF在骨髓瘤病理生理機制中的作用奠定了基礎。